摘要

精子結(jié)合劑(BSP)蛋白質(zhì)是牛精漿中的主要蛋白質(zhì)，已知部分嵌入精子膜的外葉并與含膽堿的脂質(zhì)結(jié)合存在于其中。這種插入對(duì)冷凍保存后的精液質(zhì)量產(chǎn)生負(fù)面影響通過誘導(dǎo)精子的早期獲能。表面特性假設(shè)BSP蛋白質(zhì)通過張力測(cè)量來檢查：BSP蛋白質(zhì)具有高度的表面活性。這個(gè)表明BSP蛋白不僅可以通過相互作用到達(dá)被磷脂覆蓋的界面兩者之間也是由于它們自身的表面活性。BSP蛋白的插入精子的脂質(zhì)域外葉是在仿生系統(tǒng)（如朗繆爾）上復(fù)制的單層。BSP蛋白的插入可以在含有膽堿脂質(zhì)的可壓縮流體域中進(jìn)行。單層膜也用于研究BSP蛋白的復(fù)合由兩個(gè)磷脂組裝體：來自蛋黃或脂質(zhì)體的低密度脂蛋白(LDL)來自卵磷脂。不考慮磷脂結(jié)構(gòu)（脂蛋白或脂質(zhì)體），BSP是阻礙改變膜的結(jié)構(gòu)。只有BSP蛋白：磷脂酰膽堿的總體比例很重要。兩種螯合劑的區(qū)別在于它們的表面特性：LDL有很強(qiáng)的與外層融合的趨勢(shì)，而脂質(zhì)體主要留在外層相同的時(shí)間尺度。

一、簡(jiǎn)介

精子蛋白結(jié)合劑(BSP)是一個(gè)已知的蛋白質(zhì)家族在輸卵管精子儲(chǔ)存庫的形成中發(fā)揮作用在精子獲能中，這是受精必不可少的精子成熟步驟[1,2]。在牛精漿中，三個(gè)專業(yè)以10:1:1的比例[3]對(duì)BSP蛋白進(jìn)行鑒定和分類根據(jù)Manjunath等人的命名法確定。[2]：BSP1[4]，BSP3[5]和BSP5[6,7]，分別。他們的表觀質(zhì)量BSP1和BSP3為15–16.5 kDa，BSP5為28–30 kDa[6,8]。這三種蛋白質(zhì)由一個(gè)獨(dú)特的N端結(jié)構(gòu)域組成然后是兩個(gè)纖連蛋白II型結(jié)構(gòu)域。只有N端三種BSP蛋白的結(jié)構(gòu)域差異很大[4-6]。每個(gè)纖連蛋白II型結(jié)構(gòu)域包含一個(gè)磷酸膽堿結(jié)合站點(diǎn)[9-14]。最后那些對(duì)于生物的生物學(xué)作用是必不可少的BSP蛋白質(zhì)。事實(shí)上，精子膜的外葉在射精過程中與含有BSP蛋白的精漿接觸[2,15]。BSP蛋白快速結(jié)合含膽堿的磷脂，如磷脂酰膽堿和存在于精子膜上的鞘磷脂[9,12,16-19]和通過部分插入精子的外部來覆蓋精子的表面精子質(zhì)膜的小葉[1,13,20]。這是第一個(gè)形成輸卵管精子儲(chǔ)存的關(guān)鍵步驟水庫和精子獲能之后。BSP蛋白既可溶又可插入疏水膜的事實(shí)爭(zhēng)論BSP蛋白質(zhì)的兩親性特征。因此，該本研究的第一部分旨在通過進(jìn)行張力測(cè)量來檢驗(yàn)這一假設(shè)。

BSP蛋白誘導(dǎo)的早期獲能[21,22]具有冷凍保存后對(duì)精液質(zhì)量的負(fù)面影響失去抗寒性和抗凍性[12,17,23-25]。

因此，保護(hù)者的存在對(duì)于維持精子質(zhì)量。蛋黃被廣泛用于隔離BSP蛋白[17,26-32]。這種隔離是由于特定的和強(qiáng)大的外層磷脂酰膽堿之間的相互作用蛋黃中存在低密度脂蛋白(LDL)，以及BSP蛋白[9,12,33,34]。在某些情況下，精子的保護(hù)還假設(shè)對(duì)抗LDL的早期獲能由富含LDL的極性脂質(zhì)之間的交換產(chǎn)生磷脂和精子膜中的脂質(zhì)減少和膽固醇由于外流[29]。其他磷脂，如大豆卵磷脂目前被用作磷脂的替代品蛋黃。然而，在這種情況下，之間可能的相互作用脂質(zhì)體和膜是未知的。因此，第二部分本研究的目的是比較低密度脂蛋白和脂質(zhì)體與脂質(zhì)膜接觸。為此，一空氣-緩沖液界面的單層脂質(zhì)用于模擬精子膜外葉的脂質(zhì)結(jié)構(gòu)域。這個(gè)方法被證明是有效的復(fù)制異質(zhì)牛外葉脂質(zhì)域的域精子膜[35]。最后一個(gè)由主要脂質(zhì)成分，即鞘磷脂、膽固醇、1-palmitoyl-2-docosahexaenoyl-sn-glycero-3-phosphocholine(PC)和縮醛磷脂1-(1Z-octadecenyl)-2-docosahexaenoyl-snglycero-3-phosphocholine(P-PC)。在這個(gè)單層中，膽固醇和鞘磷脂將自身結(jié)構(gòu)化為縮合結(jié)構(gòu)域被PC和P-PC的液體混合物包圍，溫度為34°C。低密度脂蛋白和脂質(zhì)體被引入單層下方的亞相在接近與生物膜相關(guān)的壓力下[36]。添加劑和單層之間的相互作用是通過監(jiān)測(cè)表面積的變化來檢測(cè)。最后，該低密度脂蛋白和脂質(zhì)體對(duì)BSP蛋白的螯合特性在相同的脂質(zhì)模型外小葉上進(jìn)行了比較。精子膜和在相同的條件下。

應(yīng)用不同組裝的磷脂酰膽堿對(duì)牛精漿蛋白的隔離——摘要、簡(jiǎn)介

應(yīng)用不同組裝的磷脂酰膽堿對(duì)牛精漿蛋白的隔離——材料與方法

應(yīng)用不同組裝的磷脂酰膽堿對(duì)牛精漿蛋白的隔離——結(jié)果與討論

應(yīng)用不同組裝的磷脂酰膽堿對(duì)牛精漿蛋白的隔離——結(jié)論、致謝！